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原理及适用范围
大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一,目前已被广泛应用于食品卫生检验工作中。大肠菌群多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方,大肠菌群数的高低,表明了食品及食品生产过程中受污染的程度。大肠菌群测试片是一种预先制备好的一次性培养基产品,培养后计数红点周围有黄晕和气泡的菌落为大肠菌群。本产品适合于食品及原料中大肠菌群的计数,如消毒牛乳、冷饮和调味品等样品的检测,也可用于表面的卫生检测。
操作方法
样品处理:取样品25mL(g)放入含有225mL灭菌生理盐水的取样罐或均质杯内,制成1:10的样品匀液,用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内,振摇后成为1:100的稀释液。
接种:一般食品选1~2个稀释度进行检测,含菌量少的液体样品(如饮用纯水和矿泉水等)可直接吸取原液进行检测。将大肠菌群测试片(BE201)置于平坦实验台面,揭开上层膜,用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上,然后再将上层膜缓慢盖下,从中间向周围轻轻推刮,使水分在圆圈内均匀分布,并将气泡赶走。每个稀释度接种两片。
培养:将测试片叠在一起放回原自封袋中,透明面朝上水平置于恒温培养箱内,堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃,培养15~24h。
结果判读
培养后红点周围有黄晕和气泡的菌落为大肠菌群菌落,菌落计数后乘以稀释倍数后即为每毫升(或每克)样品中所含的大肠菌群数。选择有阳性菌落的最高稀释度的测试片进行计数,然后乘以稀释倍数即为样品中每毫升(克)含有大肠菌群数。
附加说明
1、大肠菌群测试片不但可以大大缩短检测时间,而且检测结果与传统方法很接近,符合率可达90%左右。山东省疾病预防控制中心用EMB法进行了验证比较,结果为86%。
2、如果样品的酸碱度pH 7.0以下时,应先用灭过菌的碱性溶液(如1mol/LNaOH)调节到pH7.0~8.0,否则接种后培养基马上变黄,易造成假阳性结果。
3、一般食品对于大肠菌群的要求都比较严格,如果测试片上有成片的红点,或者中央没有红点,但边缘有很多红点,一定是已经严重超标,建议按多不可计来报告。
4、该测试片的使用方法可参考中华人民共和国出入境检验检疫行业标准《食品中大肠菌群和大肠杆菌快速计数法--PetrifilmTM 测试片法》(标准号为:SN/T 1896-2007)
保存条件
本品需存放在4~10℃冰箱中,保质期为一年,铝箔袋打开后,未用完的纸片要放回铝箔袋中封好,放到冰箱中,一个月内用完。